生物试剂 考马斯亮蓝G250染料试剂
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考马斯亮蓝G250染料试剂
简介:
Bradford法也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1 h内保持稳定。该反应非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比较好的蛋白质定量法。考马斯亮蓝G250在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。其染色原理是通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的作用力,考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
BIOISCO 考马斯亮蓝G250染料试剂主要由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸组成,多用于溶液体系中蛋白的定量分析,其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥,反应灵敏。该产品仅适用于科研实验,不可做他用。
组成:
PD004-100ml
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PD004-500ml
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Storage
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考马斯亮蓝G250染料试剂
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500ml
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RT 避光
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说明书
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一份
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保存条件:
室温避光保存,3个月有效。
操作步骤(仅供参考):
1、稀释蛋白标准(一般为BSA 5 mg/ml)使其终浓度为0.5 mg/ml。注意:蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准也应用什么溶液稀释,也可以用 0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
2、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 ul加到96孔板的蛋白标准孔中,加蛋白标准稀释液补足至20 ul。
3、加适当体积样品到96孔板的样品孔中,补加标准品稀释液至20 ul。
4、各孔加入200 ul考马斯亮蓝G250染料试剂室温放置。
5、 酶标仪测定595 nm波长处的吸光值,560~610 nm之间的波长也可。
6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
注意事项:
1、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。
2、 需可检测560~610 nm之间波长的酶标仪一台,最佳检测波长为595 nm。
3、 建议每次测定时都做标准曲线。
4、 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但测定时,考虑根据比色皿的最小检测体积。
5、 为了您的和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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