生化试剂"过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(分光光度法100T/96S) "
价格 | ¥380.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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纯度 | / | 规格 | OX001-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(分光光度法100T/96S) " |
名称 | 生化试剂"过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(分光光度法100T/96S) " |
过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
测定原理:
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。
试剂的组成和配制:
产品名称
|
OX001-50T/48S
|
Storage
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试剂一:丙酮
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60ml(自备)
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4℃
|
试剂二:粉剂
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1瓶
|
4℃
|
试剂三:液体
|
15ml
|
4℃
|
试剂四:液体
|
60ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10ml浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存;(溶解时间较长,约30min,可40℃-60℃加热溶解,务必提前准备)
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、丙酮60ml、浓盐酸10ml、研钵和冰。
H2O2提取:
1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1ml;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1ml,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μl)
|
测定管
|
对照管
|
样本
|
吸取的量的为全部上清液
|
|
试剂一
|
|
1000
|
试剂二
|
100
|
100
|
试剂三
|
200
|
200
|
4000g,25℃离心10min,弃上清,留沉淀
试剂四
|
1000
|
1000
|
加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,倒入比色皿中,测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA=A测定-A对照。
注意事项:
1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。
H2O2含量计算:
1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x为标准品浓度,μmol/ml;y为ΔA)。
2、血清(浆)中H2O2含量的计算:
H2O2含量(μmol/ml)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
3、细菌、细胞或组织中H2O2含量计算
(1)按照蛋白浓度计算
H2O2含量(μmol/mg prot)= [(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按照样本质量计算
H2O2含量(μmol/g鲜重)=[(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W
(3)按照细菌或细胞密度计算:
H2O2含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)
V1:加入反应体系中样本体积,1ml;V2:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。
注意:标曲线性范围为0.1μmol/ml到2μmol/ml,吸光度ΔA线性范围为0.07-1.5,若ΔA超过1.5则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。
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