生化试剂"黄嘌呤氧化酶(XOD)检测试剂盒(分光光度法 100T/96S) "
价格 | ¥480.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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纯度 | / | 规格 | OX003-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"黄嘌呤氧化酶(XOD)检测试剂盒(分光光度法 100T/96S) " |
名称 | 生化试剂"黄嘌呤氧化酶(XOD)检测试剂盒(分光光度法 100T/96S) " |
黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理:
XOD催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰
试剂组成和配制:
产品名称
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OX003-50T/48S
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Storage
|
提取液:液体
|
60ml
|
4℃
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试剂一:液体
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60ml
|
4℃
|
试剂二:粉剂
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4瓶
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4℃
|
说明书
|
一份
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自备仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、、细胞或组织样品的制备:
或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至290nm,蒸馏水调零。
2、XOD检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入15ml试剂一,充分混匀,现配现用;
3、测定前将XOD检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min。
4、取1mlXOD检测工作液于1ml石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀,室温下立即测定290nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
XOD活性计算:
1、血清(浆)XOD计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/ml)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=2424×ΔA
2、组织、或细胞中XOD计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T =2424×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=2424×ΔA÷W
(3)按或细胞密度计算:
单位的定义:每一万个或细胞每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=4.848×ΔA
V反总:反应体系总体积,1.035×10-3 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104 L/ mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;500:细胞或总数,500万。
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