生化试剂"二胺氧化酶（DAO）检测试剂盒(微量法100T/48S) "
| 价格 | ￥1950.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | OX024-100T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂二胺氧化酶（DAO）检测试剂盒(微量法100T/48S) ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂二胺氧化酶（DAO）检测试剂盒(微量法100T/48S) ＂ |
二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
测定原理：
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在460nm处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。
试剂组成和配制：
产品名称
|
OX024-100T/48S
|
Storage
|
提取液：液体
|
120ml
|
4℃
|
试剂一：液体
|
0.3ml
|
4℃
|
试剂二：液体
|
2.5ml
|
4℃
|
试剂三：液体
|
1.2ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
|
需自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至460nm，蒸馏水调零。
2、加样表
|
对照管
|
测定管
|
粗酶液（μl）
|
50
|
50
|
提取液（μl）
|
128
|
108
|
试剂一（μl）
|
2
|
2
|
试剂二（μl）
|
20
|
20
|
试剂三（μl）
|
|
20
|
混匀，37℃水浴30min，微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定460nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr
（2）按样本质量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/g 鲜重）= ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 18×A460÷W
（3）按细胞数量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 18×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/ml）= ×V反总÷V样÷T= 18×A460
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpr
（2）按样本质量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/g 鲜重）= ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 36×A460÷W
（3）按细胞数量计算：
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 36×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义：在pH7.2，温度为37℃条件下，每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性（nmol/min/ml）= ×V反总÷V样÷T= 36×A460
ε：氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数：7.5 L /mmol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、如果OD值小于0.01，适当加大提取用样本量；OD值大于0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
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