生化试剂"总巯基测定试剂盒(微量法100T/48S) "
| 价格 | ￥220.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | AO012-100T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂总巯基测定试剂盒(微量法100T/48S) ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂总巯基测定试剂盒(微量法100T/48S) ＂ |
总巯基测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
组成：
产品名称
|
AO012-100T/48S
|
Storage
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试剂一：液体
|
18ml
|
4℃
|
试剂二：液体
|
1ml
|
4℃避光
|
说明书
|
一份
|
|
自备仪器和用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。
样品的制备：
1.按照组织质量（g）：水体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清，培养液：稀释5倍后测定，可取0.1ml样本，加入0.4ml蒸馏水，混匀，置冰上待测。
测定操作表：
1、酶标仪预热30min，调节波长至412nm。
2、操作表
在96孔板中加入如下试剂
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对照管
|
测定管
|
样品（μl）
|
40
|
40
|
试剂一（μl）
|
150
|
150
|
试剂二（μl）
|
|
10
|
乙醇（μl）
|
10
|
|
混匀，25℃静置10min，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。
|
||
计算公式：
总巯基标准曲线：y = 1.8111x - 0.0037，R2= 1，x为标品浓度，单位μmol/ml，y为吸光度ΔA。
1. 组织：
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事项：
检出限为10μmol/L。
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