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生化试剂"超氧阴离子能力检测试剂盒(微量法100T/96S) "

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基本参数

超氧阴离子能力试剂盒说明书

微量法100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理：

AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO₂－，NO₂－与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的能力与530nm的吸光值呈负相关。

组成：

自备仪器和用品：

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

样品处理：

组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

培养液或其它液体：直接检测。

粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/ml

测定操作表：

	对照管	测定管
试剂一（μl）	10	10
试剂二（μl）	40	40
H₂O（μl）	25
充分混匀，25℃反应1min
样品（μl）		25
试剂三（μl）	50	50
充分混匀，37℃反应30min
试剂四（μl）	50	50
试剂五（μl）	50	50
充分混匀，37℃显色20min，于微量石英比色皿/96孔板，在530nm处测定对照管和测定管的吸光值，分别记为A对照管和A测定管。