生化试剂"二氢黄酮醇还原酶（DFR）检测试剂盒（微量法 100T/48S） "
| 价格 | ￥3000.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | AO020-100T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂二氢黄酮醇还原酶（DFR）检测试剂盒（微量法 100T/48S） ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂二氢黄酮醇还原酶（DFR）检测试剂盒（微量法 100T/48S） ＂ |
二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
测定原理：
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。
组成：
产品名称
|
AO020-100T/48S
|
Storage
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一：液体
|
12ml
|
4℃
|
试剂二：液体
|
1.5ml
|
4℃
|
试剂三：粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂四：液体
|
30ml
|
4℃避光
|
说明书
|
一份
|
|
试剂三：临用前加2ml蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
自备仪器和用品：
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。
酶液提取:
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm。
2、操作表
|
对照管
|
测定管
|
||
酶液（μl）
|
40
|
40
|
||
试剂一（μl）
|
140
|
120
|
||
试剂二（μl）
|
|
20
|
||
试剂三（μl）
|
20
|
20
|
||
混匀，30℃反应30min
|
||||
乙酸乙酯（μl）
|
200
|
200
|
||
37℃震荡10min，取上层溶液，N2吹干
|
||||
无水乙醇（μl）
|
100
|
100
|
||
充分震荡
|
||||
试剂四(μl)
|
300
|
300
|
||
混匀，25℃静置10min，于微量石英比色皿/96孔板中测定500nm处吸光值A。分别记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管
|
||||
计算公式:
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反总：反应总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反总：反应总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
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