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生化试剂lao氨酸解氨酶(TAL)检测试剂盒(微量法 100T/48S)

价格 1050.00/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 AO025-100T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂lao氨酸解氨酶(TAL)检测试剂盒(微量法 100T/48S)
名称 生化试剂lao氨酸解氨酶(TAL)检测试剂盒(微量法 100T/48S)


酪氨酸解氨酶(Tyrosine ammonilyaseTAL)试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

TAL广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

测定原理:

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸,使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升,根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

组成:

产品名称

AO025-100T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

50ml

4℃

试剂粉剂

2

4℃

试剂液体

5ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取:

1、、细胞或组织样品的制备:

或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)果汁等液体样品:直接检测。

测定操作表

1、酶标仪预热30min以上,调节波长至333nm

2、准备96UV板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。

3、试剂二的配置:临用前在试剂二瓶中加入10ml试剂一充分溶解待用(用不完的试剂4℃保存一周,注意现配现用),在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

4、在EP管中依次加入如下试剂

试剂名称(μl

测定管

对照管

样本上清

40

40

试剂一

360

试剂二

360

充分混匀,40℃保温60min

试剂三

20

20

混匀,10000g 4℃离心5min,取200μl上清至96UV板,333nm下测定吸光值A测定与A对照,ΔA=A测定-A对照

TAL活性计算:

1、血清(浆)或果汁TAL活性

单位的定义:每分钟每ml血清(浆)或果汁在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化

0.005为一个酶活力单位。

TALU/ml=ΔA×V反总÷( V÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA

2、组织、或细胞TAL活性

1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每分钟每mg组织蛋白在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TALU/mg prot=ΔA×V反总÷V×Cpr÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2)按样本鲜重计算:

单位定义:每分钟每g组织在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个

酶活力单位。

TALU/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V÷V样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W

3)按或细胞密度计算:

单位定义:每分钟每1万个或细胞在每ml反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。

TALU/104cell=ΔA×V反总÷(500×V÷V样总)÷0.005÷T =0.07×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.42mlV样:加入样本体积,0.04mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,60 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细胞或总数,500万。

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