伊势久生物 乙醇脱氢酶（ADH）检测试剂盒（分光光度法50T/48S）微量法100T/96S 科研专用
| 价格 | ￥300/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 乙醇脱氢酶（ADH）检测试剂盒（分光光度法50T/48S）微量法100T/96S |
| 名称 | 乙醇脱氢酶（ADH）检测试剂盒（分光光度法50T/48S）微量法100T/96S | 货号 | CE017 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD+没有 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理：
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD ，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD 没有；测定340nm 吸光度下降速率，来计算ADH活性。
组成：
产品名称 |
CE017-50T/48S |
Storage |
试剂一：液体 |
1瓶 |
室温保存 |
试剂二：液体 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三：粉剂 |
2瓶 |
-20℃ |
试剂四：液体 |
1支 |
4℃ |
说明书 |
一份 |
|
试剂三：粉剂×2瓶，－20℃保存。临用前加入22ml试剂二，现配现用。
自备仪器和用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g，4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。
3. 在1ml石英比色皿中依次加入100μl样本上清液、800μl试剂三和100μl试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T
=1608×△A
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μl=0.1 ml；T：反应时间，1min。
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