生化试剂"胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）检测试剂盒（微量法100T/96S） "
| 价格 | ￥520.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | AE006-100T/96S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）检测试剂盒（微量法100T/96S） ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）检测试剂盒（微量法100T/96S） ＂ |
胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸，同时还原NADP+生成NADPH。ICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
测定原理：
利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应，在340 nm下测定NADPH浓度的增加。
组成：
产品名称
|
AE006-100T/96S
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Storage
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提取液：
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100ml
|
4℃
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试剂一：液体
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19ml
|
4℃
|
试剂二：粉剂
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1瓶
|
4℃
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试剂三：粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
说明书
|
一份
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|
自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
1、、细胞或组织样品的制备：
或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl试剂一，混匀后立即记录340nm处20s后吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
注意事项：
1、若A2-A1大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、若A2-A1小于0.005，可延长反应时间到5min或10min。
ICDHc活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）ICDHc活力的计算:
单位的定义：每ml血清（浆）每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1608×ΔA
2、组织、或细胞中ICDHc活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1608×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=3.216×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）ICDHc活力的计算：
单位的定义：每ml血清（浆）每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=3216×ΔA
2、组织、或细胞中ICDHc活力的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=3216×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=6.432×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
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