生化试剂"肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒(微量法100T/96S) "
价格 | ¥1600.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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纯度 | / | 规格 | AE014-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒(微量法100T/96S) " |
名称 | 生化试剂"肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒(微量法100T/96S) " |
肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。
测定原理:
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。
组成:
产品名称
|
AE014-100T/96S
|
Storage
|
提取液:
|
100ml
|
4℃
|
试剂一:粉剂
|
1瓶
|
4℃避光
|
试剂二:液体
|
10ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
试剂一:粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加10蒸馏水溶解。
工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
粗酶液提取:
1.组织样本:按照组织质量(g):提取液体积()为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心15min。
2.血清样本:直接测定。
测定步骤:
1. 酶标仪预热30min,调节波长至340nm。
2.在96孔板中加入40μl样本和60μl蒸馏水,最后加入100μl工作液,立即混匀,37℃下测定初始吸光值A1与1min后的吸光值A2,ΔA=A2-A1。
CK酶活性计算:
(1)按组织蛋白含量计算
酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/ mg prot)=×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 1608×△A÷Cpr
(2)按组织样本质量计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 1608×△A÷W
(3)按血清计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/)=×V反总÷V样÷T= 1608×△A
:NADPH摩尔消光系数,6220L /mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应体系总体积,0.2;V样:反应体系中样本体积,0.04;T,反应时间,1min;Cpr:样本蛋白浓度,mg/;W:样本质量,g
注意事项:
1. 配制好的工作液4℃稳定7天,请配制后尽快使用。
2. 血清的CK不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定24h。
3. 样品蛋白质含量需要另外测定,可选用BCA蛋白含量测定试剂盒进行测定。
4. OD值大于0.5可用提取液适当稀释样品,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
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