生化试剂"赖氨酸检测试剂盒检测试剂盒(微量法 100T/96S) "
价格 | ¥1080.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品: 实验试剂,
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纯度 | / | 规格 | AC014-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"赖氨酸检测试剂盒检测试剂盒(微量法 100T/96S) " |
名称 | 生化试剂"赖氨酸检测试剂盒检测试剂盒(微量法 100T/96S) " |
赖氨酸(lysine,Lys)含量测定试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
赖氨酸是人体必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。
测定原理:
蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2,它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质,其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同,而且仅有—个游离氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。
组成:
产品名称
|
AC014-100T/96S
|
Storage
|
提取液:液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一:粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂二:液体
|
12.5ml
|
4℃
|
试剂三:液体
|
15ml
|
4℃
|
试剂四:60%乙醇(自备)
|
1瓶
|
4℃
|
说明书
|
1份
|
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。
赖氨酸提取:
样本烘干粉碎,称取约0.01g样本,加入1ml提取液,充分匀浆。80℃水浴提取20min,冷却后10000g离心10min,取上清待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2、工作液的配制:取10ml试剂一与10ml试剂二混合摇匀,取上清备用。用不完的试剂4℃保存。
3、在有盖EP管中加入下列试剂:
试剂名称(μl)
|
测定管
|
空白管
|
样本
|
100
|
|
提取液
|
|
100
|
工作液
|
200
|
200
|
混匀,80℃水浴30min(盖紧,以防止水分散失),冷却至常温。
试剂四
|
300
|
300
|
混匀,取200μl至微量石英比色皿或96孔板中,于530nm波长处记录吸光值A。△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
赖氨酸含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为y = 0.0062x - 0.0212;x为赖氨酸含量(μg/ml),y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
赖氨酸含量(μg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.1ml;V2:加入提取液体积,1 ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为y = 0.0031x - 0.0212;x为赖氨酸含量(μg/ml),y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
赖氨酸含量(μg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.1ml;V2:加入提取液体积,1 ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。
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