生化试剂"α-葡萄糖苷酶（α-GC）检测试剂盒（微量法100T/48S） "
| 价格 | ￥1080.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | GMS027-100T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂α-葡萄糖苷酶（α-GC）检测试剂盒（微量法100T/48S） ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂α-葡萄糖苷酶（α-GC）检测试剂盒（微量法100T/48S） ＂ |
α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
测定原理：
α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。
组成：
产品名称
|
GMS027-100T/48S
|
Storage
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一：粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
试剂二：液体
|
15ml
|
4℃
|
试剂三：液体
|
15ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
|
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称（μl）
|
测定管
|
对照管
|
试剂一
|
120
|
|
蒸馏水
|
|
120
|
试剂二
|
150
|
150
|
样本
|
30
|
30
|
充分混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），8000g，4℃，离心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂）
上清液
|
70
|
70
|
试剂三
|
130
|
130
|
充分混匀，室温静置2min后， 400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。
每个测定管需设一个对照管。
α-GC活力计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x -0.0027；x为标准品浓度（nmol/ml），y为吸光值。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.114×(ΔA+0.0027)
V反总：反应体系总体积，0.3ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.03ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g； 500：细胞或总数，500万；T：反应时间，30min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x -0.0027；x为标准品浓度（nmol/ml），y为吸光值。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.171×(ΔA+0.0027)
V反总：反应体系总体积，0.3ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.03ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g； 500：细胞或总数，500万；T：反应时间，30min。
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