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生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) "

价格 1050.00/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 GMS037-100T/96S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) "
名称 生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) "

葡萄糖脱氢酶(Glucose dehydrogenaseGCDH)试剂盒说明书

微量法 100/96

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GCDHEC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH,不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸钙是一种理

想的补钙制剂。因而,GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。

测定原理:

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下测定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。

组成:

产品名称

GMS037-100T/96S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

19ml

4℃

试剂二:粉剂

1

-20℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理:

组织的前处理:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

或培养细胞的前处理:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;

2、工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂4℃可保存一周;

3、将工作液置于37℃预热5分钟。

4、1ml石英比色皿中加入10μl样本和190μl工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A11min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1

GCDH活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W ×V÷V样总)÷T=3215×ΔA÷W

3)按或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min /104cell)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=6.43×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 LεNADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.01 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下:

1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W ×V÷V样总)÷T=6430×ΔA÷W

3)按或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDHnmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=12.86×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4LεNADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cmd96孔板光径,0.05cmV样:加入样本体积,0.01 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:或细胞总数,500万。

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