生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) "
价格 | ¥1050.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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纯度 | / | 规格 | GMS037-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) " |
名称 | 生化试剂"葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S) " |
葡萄糖脱氢酶(Glucose dehydrogenase,GCDH)试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH,不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸钙是一种理
想的补钙制剂。因而,GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。
测定原理:
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下测定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。
组成:
产品名称
|
GMS037-100T/96S
|
Storage
|
提取液:液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一:液体
|
19ml
|
4℃
|
试剂二:粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
说明书
|
一份
|
自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
组织的前处理:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
或培养细胞的前处理:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;
2、工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂4℃可保存一周;
3、将工作液置于37℃预热5分钟。
4、在1ml石英比色皿中加入10μl样本和190μl工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
GCDH活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3215×ΔA÷W
(3)按或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min /104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=6.43×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=6430×ΔA÷W
(3)按或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=12.86×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:96孔板光径,0.05cm;V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:或细胞总数,500万。
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