生化试剂"纤维素含量检测试剂盒（微量法 100T/96S） "
| 价格 | ￥980.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | GMS041-100T/96S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂纤维素含量检测试剂盒（微量法 100T/96S） ＂ |
| 名称 | 生化试剂＂纤维素含量检测试剂盒（微量法 100T/96S） ＂ |
纤维素（CLL）含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
测定原理：
纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
组成：
产品名称
|
GMS041-100T/96S
|
Storage
|
试剂一：液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂二：粉剂
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1瓶
|
4℃避光
|
试剂三：液体
|
10ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
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|
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。
样品的前处理：
1、细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1ml80％乙醇，室温快速匀浆，90℃水浴20min（加热过程中EP管可能爆开，建议用胶带封口或使用防爆EP管），冷却至室温，6000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，6000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1ml试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，6000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、纤维素的提取：称取烘干的CWM 约5mg，加入0.5ml蒸馏水充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入0.5ml蒸馏水匀浆，或者用匀浆器匀浆)，匀浆液转移至EP管中，用蒸馏水定容至0.5ml，置于冰水浴中，缓慢加入0.75ml浓硫酸，混匀，冰水浴中静置30min。8000g 4℃离心10min，取上清液，用蒸馏水稀释20倍后待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制：在试剂二中加入4ml试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂4℃保存一周；
4、加样表（在EP管中反应）：
试剂（μl）
|
空白管
|
测定管
|
样本
|
|
150
|
蒸馏水
|
150
|
|
工作液
|
35
|
35
|
浓硫酸
|
315
|
315
|
混匀，置95度水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定管-A空白管。
注意：
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 7.875x - 0.0043；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。
V1：加入样本体积，0.15ml；V2：加入提取液体积，1.25ml；W：样本干重，5×10-3g；20：样本稀释倍数。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 5.25x - 0.0043；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷5.25×V1]÷（W×V1÷V2）×20=4.76×(ΔA＋0.0043)
÷W。
V1：加入样本体积，0.15ml；V2：加入提取液体积，1.25ml；W：样本干重，约5×10-3g；20：样本稀释倍数。
注意：最低检测限为1mg/g干重或10ng/ mg prot
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