伊势久生物 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S 科研专用
价格 | ¥380/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S |
名称 | 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S | 货号 | GMS054 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
碱性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)测定试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX一般分离自最适生长pH为9 -11的微生物。
测定原理:
BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
组成:
产品名称 |
GMS054-50T/24S |
Storage |
缓冲液:液体 |
65ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
10ml |
4℃避光 |
试剂二:液体 |
15ml |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
试剂一:液体10ml×1瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可60℃加热溶解后使用)。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿和蒸馏水。
粗酶提取:
1.发酵液:发酵液于8000g,4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。
2.酶干粉:称约0.1mg,加1ml缓冲液溶解待测。
3.组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml缓冲液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心10min,取上清待测。
测定操作表:
对照管 |
测定管 |
|
样品(μl) |
200 |
200 |
缓冲液(μl) |
300 |
300 |
试剂一(μl) |
200 |
|
试剂二(μl) |
300 |
|
混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系) |
||
试剂一(μl) |
200 |
|
试剂二(μl) |
300 |
|
混匀,沸水浴显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),1ml玻璃比色皿,540nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 |
BAX计算公式:
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2= 0.9985
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/ml)= (ΔA 0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106
= 391× (ΔA 0.0293)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA 0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 391×(ΔA 0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/g鲜重)= (ΔA 0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 391×(ΔA 0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V样=1000μL÷200μL=5;
106:转化因子,即1mg/ml=106ng/ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。
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