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伊势久生物 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S 科研专用

价格 380/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/24S
品牌 伊势久 产品名称 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S
名称 碱性木聚糖酶(BAX)测定试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S 货号 GMS054
包装类型 测定原理 通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

碱性木聚糖酶(Basic XylanaseBAX)测定试剂盒说明书

分光光度法50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX一般分离自最适生长pH9 -11的微生物。

测定原理:

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。

组成:

产品名称

GMS054-50T/24S

Storage

缓冲液:液体

65ml

4℃

试剂一:液体

10ml

4℃避光

试剂二:液体

15ml

4℃避光

说明书

一份

试剂一:液体10ml×1瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可60℃加热溶解后使用)。

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿和蒸馏水。

粗酶提取:

1.发酵液:发酵液于8000g4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。

2.酶干粉:称约0.1mg,加1ml缓冲液溶解待测。

3.组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml缓冲液)进行冰浴匀浆,然后8000g4℃,离心10min,取上清待测。

测定操作表:

对照管

测定管

样品(μl

200

200

缓冲液(μl

300

300

试剂一(μl

200

试剂二(μl

300

混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)

试剂一(μl

200

试剂二(μl

300

混匀,沸水浴显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系)1ml玻璃比色皿,540nm处测定吸光值A计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

BAX计算公式:

标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293R2= 0.9985

1. 按液体体积活力计算:

酶活定义:50℃pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/ml= ΔA 0.0293÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106

= 391× (ΔA 0.0293)

2. 按蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/mg prot= ΔA 0.0293÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr

= 391×(ΔA 0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鲜重计算:

酶活定义:50℃pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(nmol/min/g鲜重)= ΔA 0.0293÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W

= 391×(ΔA 0.0293 ) ÷W

150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V=1000μL÷200μL=5

106:转化因子,即1mg/ml=106ng/mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW:样本质量,g

注意事项:

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。

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