伊势久生物 滤纸酶(FPA)检测试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S 科研专用
价格 | ¥650/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 滤纸酶(FPA)检测试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S |
名称 | 滤纸酶(FPA)检测试剂盒(分光光度法50T/24S) 微量法100T/48S | 货号 | GMS062 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
滤纸酶(Filter paper Activity,FPA)试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系,能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖,研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。
测定原理:
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。
组成:
产品名称 |
GMS062-50T/24S |
Storage |
试剂一:液体 |
15ml |
4℃ |
试剂二:液体 |
40ml |
4℃ |
滤纸条 |
50mg×50条 |
-- |
说明书 |
一份 |
自备仪器和用品:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。
酶液提取:
1.组织:按照质量(g):蒸馏水体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml蒸馏水)加入蒸馏水,冰浴匀浆后于4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:
1.根据样本数量取两倍数量的滤纸条和Ep管,每支Ep管中放入一个卷状滤纸条(注意要放入底部),作为底物。
2.对照管:取200μl灭活的酶液,加入500μl试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为对照管。
3.测定管:取200μl酶液,加入500μl试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为测定管。
4.对照管和测定管同时置于50℃水浴锅中反应30min。
5.加入800μl试剂二,沸水浴5min,自来水冷却后取1ml于1ml玻璃比色皿中测定540nm处吸光值,分别记为A对照管和A测定管。
酶活性计算公式:
标准曲线:y = 0.2805x - 0.0255,R2 = 0.9991
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在50℃,pH4.6条件下,每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/mg prot)=(△A 0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 0.891×(△A 0.0255)÷ Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在50℃,pH4.6条件下,每克组织每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/g 鲜重)=(△A 0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
= 0.891×(△A 0.0255)÷ W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在50℃,pH4.6条件下,每毫升培养液每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/ml)=(△A 0.0255)÷ 0.2805×V反总÷V样÷T
= 0.891×(△A 0.0255)
(4)按细胞数量计算
酶活性定义:在50℃,pH4.6条件下,每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA(U/104cell)=(△A 0.0255)÷ 0.2805×V反总÷(V样×细胞数量(万个)÷V样总)÷T
= 0.891×(△A 0.0255)÷ 细胞数量(万个)
V反总:反应总体积,1.5ml,V样:反应体系中加入样本体积,0.2ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
注意事项:
1.用干净的镊子取出滤纸条,带手套卷成卷放入Ep管底部。
2.样本灭活时保证同一批样本处理时间一致,建议沸水浴十分钟。
3.批量样本测定之前先做1-2个样本的预实验,若吸光值超过1.2,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色后取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条,以免带入毛状物,影响测定结果。
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