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生化试剂丙酮酸激酶（PK）检测试剂盒(微量法 100T/96S)

价格	￥900.00/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	GC004-100T/96S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂丙酮酸激酶（PK）检测试剂盒(微量法 100T/96S)
名称	生化试剂丙酮酸激酶（PK）检测试剂盒(微量法 100T/96S)

丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）试剂盒说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。

测定原理：

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD⁺，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。

组成：

产品名称	GC004-100T/96S	Storage
提取液：液体	100ml	4℃
试剂一：液体	20ml	4℃
试剂二：粉剂	2瓶	-20℃
试剂三：液体	10μl×2	4℃
说明书	一份

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

样本的前处理：

1、或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）试剂二的配制：临用前取试剂二一瓶，加入9ml试剂一和1.06ml蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用。

（2）试剂三的配制：临用前取试剂三一支，加入0.6ml蒸馏水充分溶解待用；现配现用。

（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、10μl试剂三和180μl试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

PK活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、血清（浆）中PK活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=1608×ΔA

2、组织、或细胞中PK活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W

（3）按或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /10⁴cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.216×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下：

1、血清（浆）中PK活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=3216×ΔA

2、组织、或细胞中PK活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W

（3）按或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PK（nmol/min /10⁴cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.432×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。