生化试剂线粒体柠檬酸（MCA）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S）
| 价格 | ￥2600.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | KC009-50T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂线粒体柠檬酸（MCA）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S） |
| 名称 | 生化试剂线粒体柠檬酸（MCA）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S） |
线粒体柠檬酸（Mitochondrion citric acid, MCA）含量试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。
组成：
产品名称
|
KC009-25T/24S
|
KC009-50T/48S
|
Storage
|
酸性提取液：液体
|
25ml
|
50ml
|
4℃
|
碱性提取液：液体
|
25ml
|
50ml
|
4℃
|
试剂一：液体
|
7.5ml
|
15ml
|
4℃
|
试剂二：液体
|
2.5ml
|
5ml
|
4℃
|
试剂三：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃
|
标准品：液体
|
1支
|
1支
|
4℃
|
说明书
|
一份
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||
KC009-25T/24S：
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入7.5ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
标准品：液体1ml×1支，10μmol/ml柠檬酸标准液，4℃保存。
KC009-50T/48S：
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入15ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存。
标准品：液体1ml×1支，10μmol/ml柠檬酸标准液，4℃保存。
自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1ml石英比色皿、研钵和蒸馏水。
线粒体中柠檬酸提取：
称0.05~0.1g样品（建议称0.1g样本），加入0.5ml酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃离心10min，弃上清（取300μl该上清液和300μl碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入0.5ml酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），取此溶液300μl和300μl碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
测定步骤：
1、分光光度计预热30 min以上，调节波长到330nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三37℃预热10min。
3、样本测定：
空白管和标准管通常只需要各做一个。
试剂名称(μl)
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空白管
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标准管
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测定管
|
试剂一
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300
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300
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300
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蒸馏水
|
300
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|
|
标准液
|
|
300
|
|
样本
|
|
|
300
|
试剂二
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100
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100
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100
|
试剂三
|
300
|
300
|
300
|
充分混匀，330nm立即测定初始吸光值A1和37℃孵育30min后的吸光值A2，ΔA=A2 –A1。
柠檬酸含量计算：
（1）按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管) ×V样]÷（V样÷Cpr）=10×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管)÷Cpr
蛋白质含量需要另外测定。
（2）按样本鲜重计算
柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管) ×V样]÷（W×V样÷V样总）=10×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管)÷W
C标准管：标准液浓度，10μmol/ml； V样：加入反应体系中样本体积，0.3ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样品蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g。
注意：检测限为10nmol/mg prot或1μmol/g鲜重。
上海跃腾生物技术有限公司
联系人：
卢经理
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