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生化试剂羟甲基戊二酰辅酶A合成酶（HMGCS）检测试剂盒（微量法 100T/96S）

价格	￥6800.00/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	KC017-100T/96S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂羟甲基戊二酰辅酶A合成酶（HMGCS）检测试剂盒（微量法 100T/96S）
名称	生化试剂羟甲基戊二酰辅酶A合成酶（HMGCS）检测试剂盒（微量法 100T/96S）

羟甲基戊二酰辅酶A合成酶（HMGCS）试剂盒说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

羟甲基戊二酰辅酶A合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA。

测定原理：

HMGCS催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA，同时产生CoASH，使DTNB转化为黄色的TNB，在412nm下有特征吸光值。

组成：

产品名称	KC017-100T/96S	Storage
提取液：液体	100ml	4℃
试剂一：粉剂	1瓶	-20℃避光
试剂二：粉剂	1瓶	-20℃避光
试剂三：液体	6ml	4℃避光
说明书	一份

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入3ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入3ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本测定的准备：

1、、细胞或组织样品的制备：

或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入25μl试剂一、25μl试剂二和50μl试剂三，混匀，加入100μl样本上清，迅速混匀后记录412nm下初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。

HMGCS活性计算：

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）活性

单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/ml）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样 ÷T=36.76×ΔA

2、组织、或细胞HMGCS活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V样÷V样总）÷T=36.76×ΔA÷W

（3）按或细胞密度计算

单位定义：每1万个或细胞每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/10⁴cel）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.074×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×10⁴L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或总数，500万。

用96孔板测定的计算公式如下：

1、血清（浆）活性

单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/ml）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样 ÷T=73.53×ΔA

2、组织、或细胞HMGCS活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V样÷V样总）÷T=73.53×ΔA÷W

（3）按或细胞密度计算

单位定义：每1万个或细胞每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCS（nmol/min/10⁴cel）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.147×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×10⁴L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.1 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或总数，500万。