生化试剂ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒（分光光度 50T/48S）
| 价格 | ￥2400.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | SA001-50T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒（分光光度 50T/48S） |
| 名称 | 生化试剂ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒（分光光度 50T/48S） |
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性测定试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理：
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
组成：
产品名称
|
SA001-25T/24S
|
SA001-50T/48S
|
Storage
|
提取液：液体
|
25ml
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50ml
|
4℃
|
试剂一：液体
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20ml
|
40ml
|
4℃
|
试剂二：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃
|
试剂三：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
-20℃
|
说明书
|
1份
|
||
SA001-25T/24S试剂二临用前加入9ml蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA001-25T/24S试剂三临用前加入5ml蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA001-50T/48S试剂二临用前加入18ml蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA001-50T/48S试剂三临用前加入10ml蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液制备：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μl）
|
测定管
|
试剂一
|
200
|
试剂二
|
320
|
样本
|
40
|
混匀，30℃保温15 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却后，4000g4℃离心5min，取上清液，在1ml石英比色皿中依次加入下列试剂
上清液
|
400
|
试剂一
|
425
|
试剂三
|
175
|
混匀后，立即于340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
AGP活性计算：
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W×V样÷V样总）÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.4；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量。
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