伊势久生物 ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒(分光光度 25T/24S)分光光度 50T/48S 微量法 100T/96S
价格 | ¥1680/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | 25T/24S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒(分光光度 25T/24S)分光光度 50T/48S 微量法 100T/ |
名称 | ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒(分光光度 25T/24S)分光光度 50T/48S 微量法 100T/ | 货号 | SA001 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGP)
活性测定试剂盒
(微量法100T/96S)
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理:
AGP催化的逆向反应生成G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性。
组成:
组分名称 |
SA002-100T/96S |
Storage |
提取液:液体 |
100ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
20ml |
4℃ |
试剂二:粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三:粉剂 |
1瓶 |
-20℃ |
说明书 |
一份 |
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入9ml蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入4ml蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液制备:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。10000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μl) |
测定管 |
试剂一 |
50 |
试剂二 |
80 |
样本 |
10 |
混匀,30℃保温15 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴迅速冷却后,4000g4℃离心5min,取上清液,在96孔板中依次加入下列试剂
上清液 |
80 |
试剂一 |
85 |
试剂三 |
35 |
混匀后,立即于340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。
AGP活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T×稀释倍数
=2813×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,2min;稀释倍数:1.75;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量。
b.使用96孔板测定的计算公式如下:
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数
=5627×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T×稀释倍数
=5627×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,2 min;稀释倍数:1.75;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量。
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