伊势久生物 结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒（分光光度25T/24S）分光光度50T/48S 微量法100T/96S
| 价格 | ￥2300/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 25T/24S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒（分光光度25T/24S）分光光度50T/48S 微量法100T/ |
| 名称 | 结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒（分光光度25T/24S）分光光度50T/48S 微量法100T/ | 货号 | SA003 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | 通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
结合态淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase，GBSS）
试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理：
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP 还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。
组成：
产品名称 |
SA003-25T/24S |
SA003-50T/48S |
Storage |
提取液：液体 |
60ml×2 |
60ml×2 |
4℃ |
试剂一：液体 |
25ml |
50ml |
4℃ |
试剂二：粉剂 |
1瓶 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三：粉剂 |
1瓶 |
1瓶 |
4℃ |
试剂四：粉剂 |
1瓶 |
1瓶 |
4℃ |
试剂五：液体 |
1瓶 |
1瓶 |
-20℃ |
试剂六：粉剂 |
1瓶 |
1瓶 |
-20℃ |
说明书 |
1份 |
||
SA003-25T/24S试剂二临用前加入7ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-25T/24S试剂三临用前加入4ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-25T/24S试剂四临用前加入9ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-25T/24S试剂五临用前加入0.5ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-25T/24S试剂六临用前加入0.5ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-50T/48S试剂二临用前加入14ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-50T/48S试剂三临用前加入8ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-50T/48S试剂四临用前加入17ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-50T/48S试剂五临用前加入1ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA003-50T/48S试剂六临用前加入1ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液制备：
称取0.1~0.2g组织（建议称取约0.1g组织），加入1ml提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1ml提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μl） |
测定管 |
样本 |
150 |
试剂二 |
270 |
混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
试剂三 |
150 |
混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 4℃离心10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可将试剂四、五和六按比例配成混合液）
上清液 |
450 |
试剂四 |
300 |
试剂五 |
15 |
试剂六 |
15 |
混匀后立即340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
GBSS活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（V样÷V样总×W）÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，7.8×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.9；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量。
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