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伊势久生物 α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 (分光光度50T/24S)微量法100T/48S 科研专用

价格 260/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/24S
品牌 伊势久 产品名称 α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 (分光光度50T/24S)微量法100T/48S
名称 α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 (分光光度50T/24S)微量法100T/48S 货号 SA009
包装类型 测定原理 还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)试剂盒说明书

试剂盒说明书

分光光度法50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义V

淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。

测定原理:

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热,在70℃钝化15min,从而测定α-淀粉酶活性。

组成:

产品名称

SA009-50T/24S

Storage

试剂一:液体

25ml

RT

试剂二:液体

20ml

4

说明书

1

自备仪器和用品:

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

粗酶液制备:

组织:称取0.1~0.2g样本(建议称取约0.1g样本),加1 ml蒸馏水匀浆;将匀浆倒入离心管中,在室温下放置提取15min,每隔5min振荡1次,使其充分提取;3000g25℃离心10min,吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 ml,摇匀,即为淀粉酶原液。

血清(浆):直接检测。

操作步骤和加样表(在1.5mlEP管中依次加入下列试剂):

1、分光光度计预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。

2、试剂一或试剂二40℃预热10min

3、测定步骤

试剂(μl

对照管

测定管

α 淀粉酶原液

250

250

70水浴15min左右冷却

蒸馏水

250

试剂二

250

40恒温水浴中准确保温5min

试剂一

500

500

混匀,95℃水浴5min,冷却, 540nm处读取对照管和测定管吸光度,计算ΔA=A测定管-A对照管。

α-淀粉酶活性计算:

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。

2、α 淀粉酶活性

1)按照样本质量计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α 淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA0.1778)÷W

2)按照蛋白质含量计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA0.1778) ÷Cpr

3)血清(浆)样本中α 淀粉酶活性计算

单位定义:每ml血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α 淀粉酶活性(mg/min/ml)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(ΔA0.1778)

V反总:反应体系总体积,0.5mlV样:加入反应体系中样本体积,0.25 mlV样总:提取液总体积,10 ml Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,gT:反应时间,5min

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