生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S)
价格 | ¥1180.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | SC004-100T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S) |
名称 | 生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S) |
蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。
测定原理:
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。
组成:
产品名称
|
SC004-100T/48S
|
Storage
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提取液:
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100ml
|
4℃
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试剂一:液体
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10ml
|
4℃
|
试剂二:液体
|
5ml
|
4℃
|
试剂三:粉剂
|
2支
|
-20℃
|
试剂四:液体
|
6ml
|
4℃
|
说明书
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一份
|
试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入1.2ml试剂二充分溶解待用,现配现用;
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在1.5ml棕色EP管中按下表依次加样):
试剂名称(μl)
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测定管
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对照管
|
样本
|
10
|
10
|
试剂三
|
40
|
|
试剂一
|
|
40
|
混匀,30℃准确水浴30min后,95℃水浴10min
试剂四
|
50
|
50
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95℃水浴5min左右,冷却至室温
蒸馏水
|
400
|
400
|
混匀,取200μl至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下测定各管
吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅰ活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0012x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/ml),y为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.05ml; V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0006x - 0.0492;x为标准品浓度(μg/ml),y为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W
V反总:反应体系总体积,0.05ml; V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。
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