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生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S)

价格 1180.00/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 SC004-100T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S)
名称 生化试剂蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒(微量法100T/48S)


蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)试剂盒说明书

微量法 100/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖是源(叶片等)光合产物向器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。

测定原理:

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。

组成:

产品名称

SC004-100T/48S

Storage

提取液:

100ml

4℃

试剂一:液体

10ml

4℃

试剂二:液体

5ml

4℃

试剂三:粉剂

2

-20

试剂液体

6ml

4℃

说明书

一份

试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入1.2ml试剂二充分溶解待用,现配现用;

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、加样表(1.5ml棕色EP管中按下表依次加样):

试剂名称(μl

测定管

对照管

样本

10

10

试剂三

40

试剂一

40

混匀,30℃准确水浴30min后,95℃水浴10min

试剂四

50

50

95℃水浴5min左右,冷却至室温

蒸馏水

400

400

混匀,取200μl至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下测定各管

吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅰ活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0012x - 0.0492x为标准品浓度(μg/ml),yΔA

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(V×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反总]÷(W× V÷V样总) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总:反应体系总体积,0.05ml V样:加入样本体积,0.01 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,30 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0006x - 0.0492x为标准品浓度(μg/ml),yΔA

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(V×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反总]÷(W× V÷V样总) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V反总:反应体系总体积,0.05ml V样:加入样本体积,0.01 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,30 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

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