生化试剂可溶性酸性转化酶（S-AI）检测试剂盒说明书（微量法 100T/48S）
| 价格 | ￥1050.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | SC012-100T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂可溶性酸性转化酶（S-AI）检测试剂盒说明书（微量法 100T/48S） |
| 名称 | 生化试剂可溶性酸性转化酶（S-AI）检测试剂盒说明书（微量法 100T/48S） |
可溶性酸性转化酶（Soluble acid invertase, S-AI）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
AI的最适pH为3～5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI（B-AI）两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中，最适 pH 为4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
测定原理：
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。
组成：
产品名称
|
SC012-100T/48S
|
Storage
|
提取液：酸性提取液
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100ml
|
4℃
|
试剂一：液体
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20ml
|
4℃
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试剂二：粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂三：粉剂
|
15ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
|
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μl）
|
测定管
|
对照管
|
样本
|
50
|
50
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试剂一
|
|
200
|
试剂二
|
200
|
|
混匀， 37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
试剂三
|
125
|
125
|
混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中，510nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
S-AI活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/ml），y为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA+0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性（μg/min/g鲜重）＝[(ΔA+0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度（μg/ml），y为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA+0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA+0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性（μg/min/g鲜重）＝[(ΔA+0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)÷T=41.6×(ΔA+0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
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