生化试剂肉桂醇脱氢酶（ CAD)检测试剂盒 （微量法 100T/96S）
| 价格 | ￥1450.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | OT006-100T/96S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂肉桂醇脱氢酶（ CAD)检测试剂盒 （微量法 100T/96S） |
| 名称 | 生化试剂肉桂醇脱氢酶（ CAD)检测试剂盒 （微量法 100T/96S） |
肉桂醇脱氢酶（Cinnamyl-alcohol dehydrogenase，CAD)试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一，是木质素单体合成反应中的最后一步，催化多种不同的肉桂醛（香豆醛、芥子醛以及松柏醛等）生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
测定原理：
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH，在340nm下测定NADPH生成速率，即可反映CAD活性。
试剂的组成和配制：
产品名称
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OT006-100T/96S
|
Storage
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
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试剂一：液体
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25ml
|
4℃
|
试剂二：粉剂
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2瓶
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-20℃
|
说明书
|
一份
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|
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
或培养细胞：
先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入10ml试剂一充分溶解混匀，室温使用涡旋振荡仪振荡溶解15min，如未溶解可适当延长振荡时间；置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后24h内用完）；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl试剂二，混匀，立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
CAD活性计算：
a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
b、用96孔板测定的计算公式如下:
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
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