伊势久生物 莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S）微量法 100T/96S 科研专用
| 价格 | ￥950/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S） |
| 名称 | 生化试剂莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（分光光度法 50T/48S） | 货号 | OT010 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | 莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
莽草酸脱氢酶（Shikimate dehydrogenase，SD）试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。
测定原理：
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
试剂组成和配制：
产品名称 |
OT010-50T/48S |
Storage |
提取液：液体 |
60ml |
4℃ |
试剂一：液体 |
60ml |
4℃ |
试剂二：粉剂 |
2瓶 |
4℃ |
说明书 |
一份 |
|
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、血清（浆）中NADP 和NADPH的提取
或培养细胞：
先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入25ml试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min，现配现用。
（2）取0.05ml样本和0.95ml试剂二于1ml比色皿中，混匀，在340 nm波长下立即记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
SD活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V×样Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol /min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
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