生化试剂莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（微量法 100T/96S）
| 价格 | ￥1750.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | OT011-100T/96S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（微量法 100T/96S） |
| 名称 | 生化试剂莽草酸脱氢酶（SD）检测试剂盒（微量法 100T/96S） |
莽草酸脱氢酶（Shikimatedehydrogenase，SD）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。
测定原理：
莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。
试剂组成和配制：
产品名称
|
OT011-100T/96S
|
Storage
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
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试剂一：液体
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25ml
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4℃
|
试剂二：粉剂
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2瓶
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
|
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
或培养细胞：
先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入10ml试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min，现配现用。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
SD活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
(1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个或细胞每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
SD（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
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