伊势久生物 漆酶检测试剂盒(分光光度法50T/24S)微量法100T/48S 科研专用
| 价格 | ￥500/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 漆酶检测试剂盒(分光光度法50T/24S) |
| 名称 | 漆酶检测试剂盒(分光光度法50T/24S) | 货号 | OT026 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | 测定ABT S自由基的增加速 率，可计算得漆酶活性 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
漆酶（Laccase）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。
测定原理：
漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
组成：
产品名称 |
OT026-50T/24S |
Storage |
提取液：液体 |
50ml |
4℃ |
试剂一：液体 |
50ml |
4℃ |
工作液：粉剂 |
1瓶 |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
|
工作液：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加25ml试剂一溶解；用不完的试剂4℃保存一周。
需自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。
酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心30min，取上清，置冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3、培养液：直接检测。
测定步骤：
试剂名称(μl) |
对照管 |
测定管 |
样本（μl） |
150 |
150 |
试剂一（μl） |
850 |
|
工作液（μl） |
850 |
60℃水浴20min后冷却至室温，取上清液测定420nm处吸光值A，△A=A测定管-A对照管。
注意事项
1、极少数样本在60℃水浴20min后会出现沉淀，可经过8000g 25℃离心10min后，取上清检测，例如成熟的水稻叶片样本。
2、为确保检测准确性，若ΔA大于2，将样本用提取液稀释2~10倍后重新检测，计算公式乘以相应稀释倍数。
酶活性计算公式：
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min /g 鲜重）= ×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 9.26×△A÷W
3、按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min/104 cell）= ×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T= 9.26×△A÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反总÷V样÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.15ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，20min。
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