生化试剂磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)检测试剂盒（微量法 100T/96S）
| 价格 | ￥1200.00/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | SGD002-100T/96S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)检测试剂盒（微量法 100T/96S） |
| 名称 | 生化试剂磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)检测试剂盒（微量法 100T/96S） |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。
测定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
组成：
产品名称
|
SGD002-100T/96S
|
Storage
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
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试剂一：液体
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18ml
|
4℃
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试剂二：液体
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16.5μl
|
4℃
|
试剂三：粉剂
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1支
|
-20℃
|
试剂四：粉剂
|
1支
|
-20℃
|
说明书
|
一份
|
|
自备仪器和用品：
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
1、或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂四的配制：临用前加入1ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、将工作液和试剂四置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。
5、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、10μl试剂四和180μl工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.1，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
PEPCK活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）PEPCK活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/ml））＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=3215×ΔA
2、组织、或细胞中PEPCK活力计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3215×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.43×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）PEPCK活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/ml））＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA
2、组织、或细胞中PEPCK活力计算
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=6430×ΔA÷W
（3）按或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
PEPCK（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=12.86×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：或细胞总数，500万。
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