生化试剂葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
价格 | ¥2850.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | SGD004-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)检测试剂盒(微量法 100T/96S) |
名称 | 生化试剂葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)检测试剂盒(微量法 100T/96S) |
2850 |
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
测定原理:
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。
组成:
产品名称
|
SGD004-100T/96S
|
Storage
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提取液:酸性提取液
|
100ml
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4℃
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试剂一:液体
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19ml
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4℃
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试剂二:粉剂
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1支
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-20℃
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试剂三:粉剂
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1支
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-20℃
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试剂四:粉剂
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1支
|
-20℃
|
说明书
|
一份
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自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
1、或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本和190μl工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.3,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
G6P活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)G6P活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/ml))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1608×ΔA
2、组织、或细胞中G6P活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3)按或细胞密度计算:
单位定义:每1万个或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)G6P活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/ml))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=3216×ΔA
2、组织、或细胞中G6P活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W
(3)按或细胞密度计算:
单位定义:每1万个细胞或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
G6P(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.43×ΔA
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:或细胞总数,500万。
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