生化试剂乙酰辅酶A羧化酶(ACC)检测试剂盒(微量法 100T/48S)
价格 | ¥1700.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | 1 | 规格 | FA001-100T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂乙酰辅酶A羧化酶(ACC)检测试剂盒(微量法 100T/48S) |
名称 | 生化试剂乙酰辅酶A羧化酶(ACC)检测试剂盒(微量法 100T/48S) |
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
测定原理:
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
组成:
产品名称
|
FA001-100T/48S
|
Storage
|
提取液:液体
|
100ml
|
4℃
|
试剂一:液体
|
10ml
|
4℃
|
试剂二:粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂三:粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
试剂四:粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂五:粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
试剂六:液体
|
25ml
|
室温
|
试剂七:液体
|
10ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入25ml蒸馏水,溶解后4℃可保存一周。
试剂五:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25ml蒸馏水,溶解后4℃可保存一周。
试剂七:10μmol/ml标准磷贮备液 10ml×1 瓶,4℃保存。
自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
1、或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1ml提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应试剂的配制和预热:在试剂二瓶中加入2.5ml试剂一,充分溶解混匀;在试剂三瓶中加入2ml蒸馏水,充分溶解混匀;将试剂一、二、三在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3、定磷试剂的配制:按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂
应为浅黄色,若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。
注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
4、0.5μmol/ml标准磷应用液配制:将试剂七20倍稀释,即取 0.5ml试剂七加9.5蒸馏水,充分混匀。
5、酶促反应
试剂名称(μL)
|
对照管
|
测定管
|
试剂一
|
90
|
|
试剂二
|
|
50
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试剂三
|
|
40
|
样本
|
10
|
10
|
37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应30min后,90℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失),冷却后,10000g 25℃离心5min,取上清
6、定磷
|
标准管
|
空白管
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对照管
|
测定管
|
0.5μmol/ml标准磷应用液
|
20
|
|
|
|
蒸馏水
|
|
20
|
|
|
上清液
|
|
|
20
|
20
|
定磷试剂
|
180
|
180
|
180
|
180
|
混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)保温30min,冷却至室温,在 660nm处,蒸馏水调零,记录各管吸光值A。标准管、空白管只要做一次即可,每个测定管需要设一个对照管。
注意:若测定管吸光值大于2,将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定,使吸光值小于2,可提高检测灵敏度,计算公式中乘以相应稀释倍数。
ACC活性计算:
1、按组织蛋白浓度计算:
定义:每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (μmol/h/mg prot)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷
(V样×Cpr)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按样本鲜重计算:
定义:每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (μmol/h /g鲜重)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷
(W× V样÷V样总)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3、按或细胞密度计算:
定义:每小时每500万或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (U/104cell)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷
(500× V样÷V样总)÷T=0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准管:标准管浓度,0.5μmol/ml;V总:酶促反应总体积,0.1ml;V样:加入样本体积,0.01ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,0.5小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g;500:或细胞总数,500万。
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