伊势久生物 乙酰辅酶A羧化酶（ACC）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S）微量法100T/48S 科研专用
| 价格 | ￥900/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂乙酰辅酶A羧化酶（ACC）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S） |
| 名称 | 生化试剂乙酰辅酶A羧化酶（ACC）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S） | 货号 | FA002 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase，ACC)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
测定原理：
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ATP和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
组成：
产品名称 |
FA002-50T/24S |
Storage |
提取液：液体 |
60ml |
4℃ |
试剂一：液体 |
20ml |
4℃ |
试剂二：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三：粉剂 |
1瓶 |
-20℃ |
试剂四：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂五：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂六：液体 |
25ml |
室温 |
试剂七：液体 |
10ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
|
试剂四：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入25ml蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。
试剂五：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25ml蒸馏水，溶解后4℃可保存一周。
试剂七：10μmol/ml标准磷贮备液 10ml×1 瓶，4℃保存。
自备仪器和用品：
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
1、或培养细胞：先收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml提取液），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应试剂的配制和预热：在试剂二瓶中加入6.5ml试剂一，充分溶解混匀；在试剂三瓶中加入5ml蒸馏水，充分溶解混匀；将试剂一、二、三在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3、定磷试剂的配制：按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂
应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
4、0.5μmol/ml标准磷应用液配制：将试剂七20倍稀释，即取 0.5ml试剂七加9.5蒸馏水，充分混匀。
5、酶促反应
试剂名称（μl） |
对照管 |
测定管 |
试剂一 |
450 |
|
试剂二 |
250 |
|
试剂三 |
200 |
|
样本 |
50 |
50 |
37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应30min后，90℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，10000g 25℃离心5min，取上清
6、定磷
标准管 |
空白管 |
对照管 |
测定管 |
|
0.5μmol/ml标准磷应用液 |
100 |
|||
蒸馏水 |
100 |
|||
上清液 |
100 |
100 |
||
定磷试剂 |
900 |
900 |
900 |
900 |
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴30min，冷却至室温，在 660nm处，蒸馏水调零，记录各管吸光值A。标准管、空白管只要做一次即可，每个测定管需要设一个对照管。
注意：若测定管吸光值大于2，将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定，使吸光值小于2，可提高检测灵敏度，计算公式中乘以相应稀释倍数。
ACC活性计算：
1、按组织蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (μmol/h/mg prot)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷
(V样×Cpr)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
定义：每小时每g组织产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (μmol/h/g鲜重)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管）÷
(W× V样÷V样总)÷T=10×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3、按或细胞密度计算：
定义：每小时每500万或细胞产生1μmol无机磷的量为一个 ACC活力单位。
ACC (μmol/h/104cell)=(C标准管×V总)×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管）÷
(500× V样÷V样总)÷T=0.02×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准管：标准管浓度，0.5μmol/ml；V总：酶促反应总体积，0.5ml；V样：加入样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，0.5小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g；500：或细胞总数，500万。
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