伊势久生物 糖原磷酸化酶b（GPb）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S）微量法100T/48S 科研专用
| 价格 | ￥800/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂糖原磷酸化酶b（GPb）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S） |
| 名称 | 生化试剂糖原磷酸化酶b（GPb）检测试剂盒（分光光度法 50T/24S） | 货号 | GCS005 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b，GPb）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。GPb在一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。
测定原理：
GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）时测定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）时测定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。
组成：
产品名称 |
GCS005-50T/24S |
Storage |
提取液：液体 |
60ml |
4℃ |
试剂一：液体 |
40ml |
4℃ |
试剂二：粉剂 |
1瓶 |
-20℃ |
试剂三：粉剂 |
1支 |
-20℃ |
试剂四：粉剂 |
1支 |
-20℃ |
试剂五：粉剂 |
1支 |
-20℃ |
说明书 |
一份 |
|
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前在试剂三瓶中加入2.5ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、试剂四的配制：临用前在试剂四瓶中加入2.5ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
5、试剂五的配制：临用前在试剂五管中加入1.25ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
6、将工作液、试剂三、试剂四和试剂五置于37℃预热5分钟；
7、1ml石英比色皿中加入50μl样本、50μl试剂三、50μl试剂四、50μl蒸馏水和800μl工作液，立即混匀，记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2，计算ΔAGPa=A2-A1。
8、在1ml石英比色皿中加入50μl样本、50μl试剂三、50μl试剂四、50μl试剂五和800μl工作液，立即混匀，记录340nm处5min后的A3和10min后的吸光值A4，计算ΔAGP=A4-A3。
注意：由于每个样本需要同时测一个GP（GPa和GPb）活性和一个GPa活性，因此本试剂盒50管测24个样本。
GPb活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPb（nmol/min/g 鲜重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。
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