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生化试剂果胶裂解酶 PL 检测试剂盒 微量法100T/48S

价格 1000/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 PCS010-100T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂果胶裂解酶(PL)检测试剂盒 (微量法100T/48S)
名称 生化试剂果胶裂解酶(PL)检测试剂盒 (微量法100T/48S)


果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。

测定原理:

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。

组成:

产品名称

PCS010-100T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

6ml

4℃

试剂二:液体

6ml

4℃

试剂三:液体

6ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒温水浴锅。

酶液提取:

1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3、培养液:直接测定。

测定步骤:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至235nm,蒸馏水调零。

2、操作表:

对照管

测定管

试剂一(μl

120

试剂二(μl

120

40℃温育3min

酶液(μl

20

20

混匀,40℃反应30min

试剂三(μl

60

60

混匀于微量石英比色皿/96孔板UV板)测定235nm处吸光值A△A=A测定管-A对照管。

酶活性计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/mg prot= △A÷ε×d×V反总÷V×Cpr÷T

= 64.1×△A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷ε×d×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 64.1×△A÷W

2. 细菌、真菌PL活性

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell= △A ÷ε×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 64.1×△A÷细胞数量

3. 培养液PL活性

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/ml= △A÷ε×d×V反总÷V÷T

= 64.1×△A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,0.2mlV样:反应体系中样本体积,0.02mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW,样本质量,gT:反应时间,30min

b.96孔板测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/mg prot= △A÷ε×d×V反总÷V×Cpr÷T

= 128.2×△A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷ε×d×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 128.2×△A÷W

2. 细菌、真菌PL活性

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell=△A÷ε×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 128.2×△A÷细胞数量

3. 培养液PL活性

酶活性定义:在40℃pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min//ml= △A÷ε×d×V反总÷V÷T

= 128.2×△A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,0.5cmV反总:反应总体积,0.2mlV样:反应体系中样本体积,0.02mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW,样本质量,gT:反应时间,30min

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