生化试剂多聚半乳糖醛酸酶 PG 检测试剂盒说明书 微量法100T/48S
价格 | ¥1000/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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纯度 | / | 规格 | PCS012-100T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒说明书(微量法100T/48S) |
名称 | 生化试剂多聚半乳糖醛酸酶(PG)检测试剂盒说明书(微量法100T/48S) |
多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonase,PG)试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白,可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,参与果胶的降解,使细胞壁结构解体,导致果实软化,与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御,细胞伸展发育以及木质化有关,在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。
测定原理:
多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
组成:
产品名称 |
PCS012-100T/48S |
Storage |
提取液:液体 |
100ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
8ml |
4℃ |
试剂二:液体 |
15ml |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后16000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液:直接检测。
测定操作表:
对照管 |
测定管 |
|
样本(μl) |
30 |
|
煮沸样本(μl) |
30 |
|
试剂一(μl) |
120 |
|
蒸馏水 |
120 |
|
40℃水浴30min |
||
试剂二(μl) |
150 |
150 |
沸水浴5min,冰浴或自来水冷却,取200μl于微量石英比色皿/96孔板测定540nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 |
注意事项:
煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟,以将酶彻底灭活。
酶活性计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996;x为标准品浓度,mg/ml;y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG活性(mg/h/mg prot)= (ΔA 0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 2.523×(ΔA 0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA 0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 2.523×(ΔA 0.008)÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG活性(mg/h/ml)=(ΔA 0.008) ÷3.9642×V反总÷V样÷T=2.523×(ΔA 0.008)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG活性(mg/h/104cell)=(ΔA 0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 2.523×(ΔA 0.008)÷细胞数量
V反总:反应总体积,0.15ml;V样:反应中样本体积,0.03ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.9821x - 0.008,R2 = 0.9996;x为标准品浓度,mg/ml;y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG活性(mg/h/mg prot)=(ΔA 0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 5.045×(ΔA 0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA 0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 5.045×(ΔA 0.008)÷W
3.按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG活性(mg/h/ml)=(ΔA 0.008) ÷1.9821×V反总÷V样÷T=5.045×(ΔA 0.008)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.0条件下,每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位(U)。
PG活性(mg/h/104cell)=(ΔA 0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 5.045×(ΔA 0.008)÷细胞数量
V反总:反应总体积,0.15ml;V样:反应中样本体积,0.03ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h。
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