生化试剂氧化型谷胱甘肽检测试剂盒 GSSG 微量法100T/96S
价格 | ¥580/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | / | 规格 | GSH004-100T/96S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂氧化型谷胱甘肽检测试剂盒(GSSG)(微量法100T/96S) |
名称 | 生化试剂氧化型谷胱甘肽检测试剂盒(GSSG)(微量法100T/96S) |
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理:
利用2-VP法测GSSG含量。
组成:
产品名称 |
GSH004-100T/96S |
Storage |
试剂一:液体 |
100ml |
4℃ |
试剂二:液体 |
600μl |
4℃ |
试剂三:液体 |
50ml |
4℃ |
试剂四:液体 |
2.5ml |
4℃ |
试剂五:液体 |
15μl |
-20℃ |
试剂六:粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
说明书 |
一份 |
试剂五: 液体15μL×1瓶,-20℃保存。临用前加入0.3ml试剂三稀释,4℃保存。
试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入20 ml试剂三溶解,现配现用。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
GSSG含量测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。
3.取1 ml EP管,加入100μ l上清液,5 μ l试剂二,盖紧后混匀,得混合液,置于37℃水浴30min;取21μ l混合液于96孔板,然后依次加入20 μ l试剂四、2 μ l试剂五和140 μ l试剂六,迅速混匀后,测定30 s和150 s光吸收A1和A2,计算ΔA=A2-A1。
GSSG含量计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0276x-0.0011;x为标准品浓度(nmol/ml),y为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA 0.0011)÷0.0276×V样÷(V样×Cpr)
=36.23×(ΔA 0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA 0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×W)
=36.23×(ΔA 0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA 0.0011)÷0.0276×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)
=36.23×(ΔA 0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG(nmol/ml)=(ΔA 0.0011)÷0.0276×V样÷V样
=36.23×(ΔA 0.0011)
V样:反应中加入样本体积,20μL;V样总:加入提取液体积, 1ml;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/ml)
b.使用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0138x-0.0011;x为标准品浓度(nmol/ml),y为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG(nmol/mg prot)=(ΔA 0.0011)÷0.0138×V样÷(V样×Cpr)
=72.46×(ΔA 0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG(nmol /g 鲜重)=(ΔA 0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×W)
=72.46×(ΔA 0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG(nmol/104 cell)=(ΔA 0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)
=72.46×(ΔA 0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG(nmol/ml)=(ΔA 0.0011)÷0.0138×V样÷V样
=72.46×(ΔA 0.0011)
V样:反应中加入样本体积,20μL;V样总:加入提取液体积, 1ml;W:样品质量,g,Cpr:样本蛋白浓度(mg/ml)
注意事项:
1.提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2.临用前配制的试剂配好后4℃保存,2天内使用完毕。
3.最低检出限为0.1μmol/L。
4.反应温度严格来说,为保证重复性,应在25℃下进行反应。
5.反应时间需精确控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。
6.样品中的GSSG浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀释倍数要尽量大些。
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