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生化试剂细胞色素b5检测试剂盒 微量法 100T/96S

价格 580.00/盒
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基本参数

纯度 / 规格 CP010-100T/96S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂细胞色素b5检测试剂盒 微量法 100T/96S
名称 生化试剂细胞色素b5检测试剂盒 微量法 100T/96S


细胞色素b5Cytochrome b5)含量测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。

测定原理:

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有最大吸收峰,通过测定424nm490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。

组成:

产品名称

CP010-100T/96S

Storage

试剂一:粉剂

2

4℃

试剂二:液体

1

4

试剂三:粉剂

1

4

说明书

一份

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前各加100ml蒸馏水,充分溶解。

工作液配制:

临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二20ml充分溶解,4℃避光可保存1周。

自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

样品中细胞色素b5提取

1除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1ml试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转入超速离心管中。

2粗制微粒体:100 000g4℃离心60min,弃上清液。

3除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1ml试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5ml,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。

细胞色素b5含量测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min

2. 工作液置于25℃水浴中预热30 min

3. 空白管:1ml玻璃比色皿,加入10 μl蒸馏水,200μl工作液,室温静置2 min424nm490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A空白管1490nm处吸光值记为A空白管2△A空白管= A空白管1- A空白管2

4.测定管:1ml玻璃比色皿,加入10 μl待测液,200μl工作液,室温静置2 min424nm490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A测定管1490nm处吸光值记为A测定管2

△A测定管= A测定管1- A测定管2

注意:只需要做一个空白管。

样品细胞色素b5含量计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

细胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷Cpr×V样)

= 122.8×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

细胞色素b5含量(nmol/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×V样总÷V样)÷W

= 61.4×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数,171×10-6L/nmol/cmd:比色皿光径(cm),1cmV反总:反应体系总体积,210 μl=2.1×10-4LCpr:待测液蛋白质浓度(mg/ml),需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积,10 μl=0.01 mlV样总:待测液总体积,0.5 mlW:样品质量(g)。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

细胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷Cpr×V样)

= 245.6×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

细胞色素b5含量(nmol/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×V样总÷V样)÷W

= 122.8×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数,171×10-6L/nmol/cmd96孔板光径(cm),0.5cmV反总:反应体系总体积,210 μl=2.1×10-4LCpr:待测液蛋白质浓度(mg/ml),需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积,10 μl=0.01 mlV样总:待测液总体积,0.5 mlW:样品质量(g)。

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