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快速内切酶ClaI 快速限制性内切酶

价格 240.00/袋
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基本参数

纯度 · 规格 MD038-50Rxns
品牌 伊势久 用途范围 生化研究
产品规格 50 Rxns 产品名称 快速内切酶ClaI

DSCF1422MD038-1.jpg1c6db9b818215fc0e021b79e896fcb9.pngDSCF1542-MD038-3.jpgDSCF1423-MD038-2.jpg


快速内切酶ClaI

REF: MD038

5'...A T C G A T...3'

3'...T A G C T A...5'

同裂酶:BspDIBanIIIBsa29IBseCIBshVIBsiXIBsp106IBspXIBsu15IBsuTUIZhoI

注:同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

建议反应条件

Reaction缓冲液;

37℃温育;

参照“DNA 快速酶切流程配制反应体系。

失活条件80℃ 温育 20 min



产品组成

组分 / 规格

MD038-50Rxns

Storage

快速内切酶ClaI

50 μl

-20℃

10× ReactionBuffer

1 ml

-20℃

10× ReactionColor Buffer

1 ml

-20℃

产品说明

快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒DNAPCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶 快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,伊势久去磷酸化、连接试剂在 Reaction酶切 Buffer 中具有 100% 活性,支持一管化反应,提升酶切修饰连接的体验。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

冰上按照下表配制反应体系:

质粒DNA

PCR 产物

基因组DNA

ddH2O

15μl

16μl

30μl

10× ReactionBuffer 10× ReactionColor Buffer

2μl

3 μla

5μl

底物 DNA

2 μl(up to 1 μg)

10 μl(~0.2 μg)

10 μl(5 μg)

快速内切酶 ClaI

1μl

1μl

5μl

Total

20μl

30μl

50μl

a. 本体系适用于经过纯化的PCR 产物酶切。未纯化的PCR 产物具备一定的离子强度,10× ReactionBuffer 加入量可适当减少至2μl。但由于DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR 产物进行纯化。

轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;

③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 minPCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);

④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。

2. 双酶切或多酶切

每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;

所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10

如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

DNA

1 μg

2 μg

3 μg

4 μg

5 μg

快速内切酶 ClaI

1μl

2μl

3μl

4μl

5μl

10× ReactionBuffer 10× ReactionColor Buffer

2μl

2μl

3μl

4μl

5μl

Total

20μl

20μl

30μl

40μl

50μl

注:如果总反应体系大于 20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

质量控制

质控项目

质控标准

功能活性检测

最适反应温度下,在 20 μl反应体系中,1 μl快速内切酶 ClaI 能够在 15 min内完全消化 1 μgλDNA

星号活性测试

最适反应温度下,将1 μl快速内切酶 ClaI 1 μgλDNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性

酶切连接再酶切检测

最适反应温度下,使用 1 μl快速内切酶 ClaI 消化底物,回收酶切产物。在 22 ℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下,使用 1 μl快速内切酶ClaI 1 μg超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。

不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

15

0

1

0

0

0

2

2

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

序列可能重叠

剪切阻断

无影响

序列完全重叠

无影响

序列可能重叠

剪切可能受影响

剪切阻断

在不同反应缓冲液中的活性

BIOISCO

Thermo Scientific

NEB

Takara

ReactionBuffer

FastDigest Buffer

CutSmart? Buffer

QuickCut? Buffer

活性

100%

100%

100%

100%

注:活性数据来自 BIOISCO 限制酶标准反应体系下的检测。

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