伊势久生物 二代M-MLV逆转录单酶
| 价格 | ￥138.00/袋 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000袋 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区：上海 上海市
主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | · | 规格 | 2000 U |
| 品牌 | 伊势久生物 | 用途范围 | 生化研究 |
| CAS | · | 包装类型 | 袋 |
| 保质期 | 年 | 产品规格 | 2000 U |
| 产品名称 | 二代M-MLV逆转录单酶 | 化学名 | RTase II |
| 类别 | 逆转录 | 储存 | -20℃ |
RTase II
REF: MR001
储运条件
-20℃ 保存。
产品组成
组分/规格
|
MR001S-2000 U
|
MR001M-10000 U
|
RTase II (200 U/μl)
|
10 μl
|
50 μl
|
5× M-MLV First Strand Buffer
|
200 μl
|
1ml
|
0.1 M DTT
|
100 μl
|
500 μl
|
产品简介
RTase II 是通过基因修饰和重组技术克隆表达的 RNase H 活性缺失型莫洛尼氏鼠白血病毒（Moloney Murine Leukemia Virus, M-MLV）逆转录酶。本酶可在比常规M-MLV RT 更高的温度下合成第一链cDNA，从而提供更高的特异性，更高的的cDNA产量和更多的全长产物，可用于较长的cDNA 合成。
活性定义
在37℃条件下，以 Poly(A)-Oligo(dT) 为模板 / 引物，在 10 min内，掺入 1 nmol 的 [3H] dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
质控标准
1. 宿主原性DNA检测
无宿主DNA污染。
2. 核酸内切酶活力检测
将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
3. 核酸外切酶检测
将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
使用方法
第一链 cDNA 合成步骤
1. 于冰上配制如下反应体系：
试剂
|
使用量
|
引物
|
X μl
|
Oligo(dT)20
或随机引物
或基因特异性引物
|
终浓度2.5μM
|
终浓度2.5ng/μl
|
|
终浓度0.25μM
|
|
模板 RNAa
|
50ng~1μg/20μl
|
dNTP Mix (10 mM Each)
|
1μl
|
Nuclease-Free Water
|
To 13 μl
|
a. 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。
2. 将以上混合液在 65℃温育 5 min，迅速取出置于冰上冷却 1 min；
3. 向反应混合液中继续加入：
试剂
|
使用量
|
5× M-MLV First Strand Buffer
|
4 μl
|
0.1 M DTT
|
1 μl
|
RTase II (200 U/μl)
|
1 μl
|
（可选）RNase Inhibitor (40 U/μl)
|
1 μl
|
4. 轻柔吸打混匀后，瞬离；
5. 若使用 Oligo(dT)20 或基因特异性引物，42℃温育 30 min；若使用随机引物，先 25℃温育 5 min，之后 42℃温育 30 min；
6. 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
7. 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可长期储存。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床上的安全性和有效性并未被鉴定，不适用于医疗临床诊断。
上海跃腾生物技术有限公司
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卢经理
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