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1 um羧基磁珠化学发光磁珠发光免疫磁珠1微米羧基磁球

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Bead diameter:1 μm
Concentration:10 mg/ml (7-12 x 109beads/ml)

三、缓冲液
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Quench Buffer（淬灭缓冲液）:
Storage Buffer（储存缓冲液）:

以下方案为配体与100μL的 Homo -COOH羧基磁珠的偶联方案。该方案可按需放大或缩小。强烈建议对珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶联条件（配体浓度、偶联缓冲液、pH、反应体积和温育时间）进行优化。
■ 通过涡旋确保磁珠均匀悬浮。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES缓冲液（pH 6.0）可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时，寡核苷酸末端应有5"-胺基以偶联磁珠。

该方案被推荐用于将蛋白偶联到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亚胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反应性中间体。除去EDC后，加入蛋白质配体并通过蛋白质上的伯胺与磁珠的活化羧基偶联。
2. 涡旋振荡重悬Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再次清洗羧基磁珠两次。
6. 向磁珠中加入80μL偶联缓冲液和20μL新配的EDC溶液，混匀。室温孵育15分钟，磁分离并吸弃上清。
注意：该步骤应该快速进行，因为磁珠上的胺反应性中间体不稳定。
9. 室温下孵育30分钟。根据配体和浓度的不同，最佳孵育时间可能为0.5?4小时。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

该方案与上述方案类似，但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。
2. 涡旋振荡重悬 Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。
偶联方案C：一步偶联
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸进行偶联。放在冰上。
3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
5. 从磁力架上取下EP管。在80μL偶联缓冲液中加入50?400μg配体。
7. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。
9. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清含未结合的配体，如果优化方案可以保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。
13. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。
部分采用本磁珠文献
p background-color:#ffffff;"="" style="box-sizing: border-box; margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;"1. Qiuyuan Lin, Zhipeng Huang, Xin Ye, Bin Yang, Xueen Fang, Baohong Liu, Hui Chen, Jilie Kong,Lab in a tube: Isolation, extraction, and isothermal amplification detection of exosomal long noncoding RNA of gastric cancer, Talanta, Volume 225, 2021, 122090, （羧基聚合物磁珠Homo-COOH偶联抗体）

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