伊势久生物 PolyLea非脂质体转染试剂 0.5ml 1ml 5×1ml 科研专用
价格 | ¥468.00/瓶 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000瓶 |
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主营产品: 实验试剂,
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纯度 | / | 规格 | 0.5ml |
品牌 | 伊势久 | 用途范围 | 生化研究 |
包装类型 | 瓶 | 保质期 | PolyLea非脂质体转染试剂 |
产品规格 | 0.5ml | 产品名称 | 4℃,12个月 |
产品用途 | 生化研究 | 名称 | PolyLea非脂质体转染试剂 |
PolyLea 非脂质体转染试剂
简介:
外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE- 葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。目前常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们容易透过细胞膜,其中阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,在体内它迅速被血清去除,会肺组织内累积诱发强烈的抗炎反响,这将导致高水平的毒性,由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
BIOISCOPolyLea 非脂质体转染试剂(PolyLea Transfection Reagent 采用专利配方的阳离子聚合物为主要成分,其高度的分支结构确保了高正离子电荷密度,使得与带有负电荷的外源基因结合更有效,容易被细胞吸收,排斥少,因此能显著提高外源基因的转染效率,适合多种类型的细胞系,细胞存活率高,可以广泛用于瞬时转染和稳定转染。
BIOISCO PolyLea 非脂质体转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有较高的转染效率,较好的重复性 ,且操作简以及单细胞毒性较小,可用于贴壁 细胞和 悬浮 细胞,与LipofectamineR2000 Reagent 相似。该转染试剂转染细胞时,根本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响,即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最正确的转染效果,推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。
组成:
产品名称
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CD012-0.5ml
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CD012-1ml
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CD012-5×1ml
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Storage
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PolyLea非脂质体转染试剂
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0.5ml
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1ml
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5×1ml
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4℃
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说明书
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一份
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保存条件:
4℃保存,12个月有效。
自备材料:
1、胰蛋白酶消化液
2、完全培养液和不完全培养液
3、PBS
操作步骤(仅供参考):
(一)DNA 转染:
1、(以 12 孔板为例)在转染前 18 ~24h 用胰蛋白酶消化培养细胞,取适量对数期细胞转移至 12 孔板中,并将细胞培养板置于CO2 培养箱培养,待细胞密度到达即可进行转染。后续操作步骤均按 12 孔板计算,如果转染器皿不同,请按比例自行调节用量。
2、在参加待转染的 DNA 之前 2~4h,参加不含抗生素的完全培养液,置于 CO2 培养箱培养。也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液,但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。
3、配制转染工作液:取两个无菌离心管,分别参加不含抗生素和血清的培养液,取其中一离心管参加DNA ,轻轻混匀;取另一离心管参加PolyLea 非脂质体转染试剂,轻轻混匀。室温静置,将含有 DNA 的培养液用微量移液器轻轻参加含 PolyLea 非脂质体转染试剂的培养液中,轻轻吹打混匀,室温静置。
4、将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中,轻轻混匀后置于CO2培养箱中进行培养。
5、培养后,更换为含有血清的完全培养液。对于Hela 细胞,推荐在转染更换培养液;对于 NIH3T3 、CHO 、HEK293T 和 HEK293FT 细胞,推荐在转染更换培养液。
6、继续培养后,观察或收集细胞或参加适当的筛选药物如G418 等进行稳定细胞株的筛选。
不同细胞器皿转染时培养液、DNA 、PolyLea 非脂质体转染试剂用量表
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96-well
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24-well
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12-well
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6-well
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6cm dish
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10cm dish
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铺板培养液
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0.15ml
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0.5ml
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1ml
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2ml
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5ml
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10ml
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无血清培养液
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15μl
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25μl
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50μl
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100μl
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200μl
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500μl
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DNA
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0.2μg
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0.8μg
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1.6μg
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4μg
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8μg
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24μg
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无血清培养液
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15μl
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25μl
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50μl
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100μl
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200μl
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500μl
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PolyLea脂质体转染试剂
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0.4μl
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1.6μl
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3.2μl
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8μl
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16μl
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48μl
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注意:对于12 孔板中一个孔的细胞,PolyLea 非脂质体转染试剂的用量可以在范围内进行适当调节,DNA 用量建议,但也可在范围内进行适当调节。通常 DNA 用量(μg)和 PolyLea非脂质体转染试剂(μl)用量比例为 1:2~6 ,如有必要可在 1:1~10 的范围内优化转染效果。为了获得最正确的转染效果,不同的细胞类型和培养条件有所不同,可在上述推荐范围内自行优化转染条件。
(二)siRNA 转染:
1、(以 12 孔板为例)在转染前用胰蛋白酶消化培养细胞,取适量对数期细胞转移至 12 孔板中,并将细胞培养板置于 CO 2培养箱培养,待细胞密度到达即可进行转染。后续操作步骤均按 12 孔板计算,如果转染器皿不同,请按比例自行调节用量。
2、在参加待转染的 siRNA 之前 2~4h ,参加 1ml 不含抗生素的完全培养液,置于 CO2培养箱培养。也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液,但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。
3、配制转染工作液:取两个无菌离心管,分别参加不含抗生素和血清的培养液,取其中一离心管参加 siRNA ,轻轻混匀;取另一离心管参加PolyLea 非脂质体转染试剂,轻轻混匀。室温静置,将含有 siRNA的培养液用微量移液器轻轻参加含 PolyLea 非脂质体转染试剂的培养液中,轻轻吹打混匀,室温静置。
4、将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中,轻轻混匀后置于CO2 培养箱中进行培养。
5、培养后,更换为含有血清的完全培养液。对于Hela 细胞,推荐在转染4h 更换培养液;对于 NIH3T3 、CHO 、HEK293T 和 HEK293FT 细胞,推荐在转染 6h 更换培养液。
6、继续培养后,观察或收集细胞。
不同细胞器皿转染时培养液、siRNA 、PolyLea 非脂质体转染试剂用量表
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96-well
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24-well
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12-well
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6-well
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6cm dish
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10cm dish
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铺板培养液
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0.15ml
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0.5ml
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1ml
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2ml
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5ml
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10ml
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无血清培养液
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15μl
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25μl
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50μl
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100μl
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200μl
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500μl
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siNA
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5pmol
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20pmol
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40pmol
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100pmol
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200pmol
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600pmol
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无血清培养液
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15μl
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25μl
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50μl
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100μl
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200μl
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500μl
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PolyLea脂质体转染试剂
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0.25pl
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1μl
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2μl
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5μl
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10μl
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30μl
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注意:对于12 孔板中一个孔的细胞,PolyLea 非脂质体转染试剂的用量可以在范围内进行适当调节,siRNA 用量建议在范围内进行适当调节。通常siRNA 用量(pmol)和 PolyLea非脂质体转染试剂(μl)用量比例,如有必要可以在 10~40:1 范围内优化转染效果。为了获得最正确的转染效果,不同的细胞类型和培养条件有所不同,可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。siRNA 的推荐浓度为,常用浓度范围为。对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的 PolyLea 非脂质体转染试剂和 siRNA 混合物分别配制,然后一起混合在同一个离心管内,后续混匀并孵育后,按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。对于其它培养板或培养器皿,各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或 RNA 等可以参考转染 DNA 的条件进行。
注意事项:
1、注意无菌操作,尽量防止污染,
2、使用高纯度 DNA 或 RNA 有助于获得较高的转染效率,同时 DNA 不应含有蛋白和酚。
3、影响转染效率的因素有很多,如细胞类型、细胞状态及密度、DNA/siRNA 转染量、转染试剂与 DNA/siRNA 比例等,应该在具体实践中优化来确定最正确转染条件。
4、为了取得较高的转染效率,推荐使用在 50 代以内的细胞进行转染,转染前细胞必须处于良好的生长状态。
5、为了取得较高的转染效率,推荐使用高纯度的质粒,OD260 /OD 280≥1.8。
6、PolyLea 非脂质体转染试剂不应 Vortex 或离心,宜缓慢晃动混匀。
7、在体外细胞转染试验中,可通过预实验在PolyLea 非脂质体转染试:DNA(g)=2:1~6:1 之间选择最正确的比例。
8、为了您的平安和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
9、本产品仅由于科研,严禁他用。
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