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伊势久生物 苏丹Ⅲ酒精饱和溶液 脂类染色 科研用

价格 195.00/瓶
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基本参数

纯度 · 规格 100ml
品牌 伊势久 用途范围 生化研究
包装类型 保质期 12个月
产品名称 苏丹Ⅲ酒精饱和溶液 类别 脂类染色
外观性状 液体 货号 SL007

福尔根DNA染色液(Feulgen stain)

简介:

脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有 Feulgen 法、甲基绿-派洛孙法、吖啶橙荧光法等,其中最经典的是 Feulgen , Feulgen 法是一种经典的酶组织化字法。BIOISCO Feulgen stain 的原理在于:DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与 Schiff 试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有 DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团),所以凡含有DNA的部位,就呈紫红色。但是该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此 RNA 用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明RNA

组成:

产品名称

SNA007-3×50ml

Storage

试剂(A): Schiff reagent

50ml

4℃避光

试剂(B):

SO2

B1: 亚硫酸盐溶液

50ml

RT

B2: 弱酸溶液

50ml

RT

说明书

一份

保存条件

4℃,避光保存,6个月有效

自备材料:

1、蒸馏水或去离子水

2、系列乙醇

3、加热设备

4、染色缸

操作步骤(仅供参考)

() 石蜡切片染色

1、组织固定:Carnoy 固定的石蜡切片较好,10%的福尔马林亦可,不宜使用 Bouin 固定液。

2、弱酸工作液的配制:按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制,即取弱酸溶液 1 份、蒸馏水 4 份,充分混合,即获得弱酸工作液。

3、石蜡切片脱蜡至双蒸水。

4、室温下在弱酸工作液中浸洗一下。

5、切片放入已预热到60℃的弱酸工作液,孵育8min

6、切片放入室温的弱酸工作液中冲洗1min

7、蒸馏水冲洗。

8、切片入 Schiff reagent 内,置于室温暗处染色30~60min

9、在上述染色过程中,配制 SO2水工作液。按照亚硫酸盐溶液:弱酸溶液:蒸馏水=5:1:94

的比例配制 SO2水工作液,即取亚硫酸盐溶液 1 份、弱酸溶液 1 份、蒸馏水 94 份,

充分混合,即获得 SO2水工作液。即配即用,不易久置。

10、用新鲜配制的 SO2水工作液洗切片 3 次,每次 90s

11、蒸馏水中洗净。

12、经系列乙醇脱水。

13、二甲苯透明并封片。

()冰冻切片染色

1、冰冻切片预处理:先用乙酸 1 份、无水乙醇 3 份混合后,即为固定液,固定 10min

2、由无水乙醇脱水--逐级下行--双蒸水。

3、弱酸工作液的配制:按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4 的比例配制弱酸工作液,即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份,充分混合,即获得弱酸工作液。

4、余下步骤同上述石蜡切片染色。

染色结果:

细胞核内DNA红紫色

阴性对照:

将同样切片经上述步骤, 只有步骤5改为放入室温的弱酸工作液,室温放置 15min。其结果为细胞核 DNA 阴性。

注意事项:

1、水解时间很重要,并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。

固定液

水解时间(min)

Carnoy 固定液

8min

Helly 固定液

8min

Susa 固定液

18min

福尔马林

8min

Zenker

5min

2、注意 Schiff reagent 的纯净程度,若变浅粉红亦可考虑使用,颜色变红则不能用。

3、去除切片上多余的 Schiff reagent 的方法应以 SO2水洗法为好。

4、应作阴性对照试验。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6本产品仅由于科研,严禁他用。

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