伊势久生物 AL蛋白酶抑制剂混合液(1mg/ml)酶抑制剂 生化研究 科研用
价格 | ¥286.00/瓶 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000瓶 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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进入店铺基本参数
纯度 | · | 规格 | 1ml |
品牌 | 伊势久生物 | 用途范围 | 生化研究 |
包装类型 | 瓶 | 保质期 | 12个月 |
产品名称 | AL蛋白酶抑制剂混合液(1mg/ml) | 类别 | 酶抑制剂 |
外观性状 | 液体 | 货号 | PI005 |
碱性蛋白酶(Alkaline protease, AKP)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理:
在碱性条件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,测定680nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
组成:
产品名称
|
PI005-50T/24S
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Storage
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试剂一:液体
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90ml
|
4℃
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试剂二:粉剂
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1瓶
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4℃
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试剂三:粉剂
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1瓶
|
4℃避光
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试剂四:粉剂
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1瓶
|
4℃
|
试剂五:液体
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10ml
|
4℃
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标准品:液体
|
1ml
|
4℃
|
说明书
|
一份
|
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加10 ml蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入20 ml试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。
试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存。临用前加50 ml蒸馏水溶解。
标准品:液体1ml×1支,0.25 μ mol/ml标准酪氨酸溶液,4℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 ml EP管、1ml玻璃比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
血清或培养液:直接测定。
细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:
1.分光光度计预热30min,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min。
3. 对照管:取一支EP管,加入100μL粗酶液(血清或培养液),200μL试剂二,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入200μL试剂三,混匀后8000g,4℃离心10min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入1000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A对照管。
4. 测定管:取一支EP管,加入100μL粗酶液(血清或培养液),200μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入200μL试剂二,混匀后8000g,4℃离心10min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入1000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与对照管不同,先加试剂三,后加试剂二)
5.空白管:取一支EP管,加入200μL蒸馏水,1000μL试剂四200μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A空白管。
6.标准管:取EP管,加入200μL标准品,1000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A标准管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。
计算公式:
1. 按照样本蛋白浓度计算
AKP活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /mg prot)= C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(Cpr×V1)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按照样本质量计算
AKP活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1 nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /g鲜重)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(W×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3. 按照液体体积计算
AKP活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min/ml)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷V1÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
按照细胞数量计算
AKP活性单位定义:30℃每104个细胞每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
AKP活性(nmol/min /104cell)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷(细胞数量×V1÷V2)÷T= 125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量
C标准品:0.25 μ mol/ml标准酪氨酸溶液;V反总:酶促反应总体积,0.5ml;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/ml);V1:加入反应体系中粗酶液体积(ml),0.1 ml;V2:提取液总体积(ml),1ml;T:催化反应时间(min),10min;W:样品质量(g)。
注意事项:
临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。
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