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北京普利莱基因技术有限公司
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所在地区:北京市 市辖区
主营产品: WB蛋白相关所有试剂, 抗体, 转染试剂, 染色液,
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品牌 | 普利莱 | 产品名称 | 普利莱 甘油酶法测定试剂盒 E1002-250 |
产品规格 | 250次 | 储存 | 具体参照说明书操作 |
储存周期 | 具体参照说明书操作 | 供货能力 | 现货 |
供货数量 | 978 | 产品品牌 | APPLYGEN |
可售卖地 | 全国 | 用途 | 测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。 |
货号 | E1002-250 |
液体样本甘油酶法测定试剂盒 E1002
描述:甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能够水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能够水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样,甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标,但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典的GPO-Trinder酶学反应方法,通过比色测定液体样本中的甘油含量。经过优化后,操作步骤更加简单,检测线性范围在10-1200μmol/L,可靠性和重复性俱佳,适合生物医学、食品实验室检测。
原理:在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘油浓度。
组成:(以250次为例)
(1)R1试剂40 ml
(2)R2试剂10 ml
(3)4 mmol/L甘油标准品1 ml
4 oC保存,6个月有效
所需设备:酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
一样本处理:
1.酒类、饮品、清澈液体样本:可直接进行测定,如超过线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再进行测定。
2.培养液:取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基,如有细胞碎片应4oC,,12,000g离心5min,取上清进行测定。
3.血液:对于新鲜抗凝血而言,可4oC,2,000g离心5min得到血浆;而对于非抗凝血来说,可先4oC静置2h得到血清后,2000g离心10min,除去血细胞。将得到的血浆/血清70oC加热10分钟灭活內源脂肪酶,12,000g离心10min ,去上清进行测定或-20oC保存。
二工作溶液配制:按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可,立即使用或4oC保存1天,变色弃去。
三标准品稀释:用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
四甘油浓度测定:
1.参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致,减小实验误差,可先加入标准品、待测样品,然后再加入工作溶液。(注意:当甘油浓度较低时,可将待测样品与工作溶液按照100μl:100μl体积进行混合,然后再进行测定,但是如果样品体积超过100μl时将会稀释工作液中酶的浓度,致使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围的时候,可进行适当稀释,然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。)
2.37oC或25oC反应15分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
3.先用蒸馏水 工作液的空白管调零,然后测定各管OD值。
4.绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式-和-R2值-。
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