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蛋白质羰基测试盒

价格	￥900.00/盒	￥850.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

联系人：伍雅君

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/24样100管/48样

蛋白质羰基含量测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式实验之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

测定原理：

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂 0.1g×5 支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10个样品用量）

试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。

试剂六：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

样品处理：

1. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，于4℃，4000g 离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置 10min，4℃，10000g 离心10min，取上清待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体样本：直接测定。

测定步骤和操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至370nm。

2、操作表

	对照管	测定管
样品（μL）	60	60
试剂二（μL）		120
试剂三（μL）	120
混匀，37℃避光反应 1h
试剂四（μL）	150	150
静置 5min，4℃，12000rpm 离心 15min，弃上清，留沉淀
试剂五（μL）	300	300
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
试剂五（μL）	300	300
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
试剂五（μL）	300	300
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
试剂六（μL）	300	300
漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm 离心 15min，取上清 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，试剂六调零，测定 A 370 。ΔA=A 测定管-A 对照管