环氧基磁珠聚合物包覆磁珠G-Epoxy高环氧基密度磁珠
价格 | ¥9999.00/支 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 江苏 苏州 | 可售量 10000支 |
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环氧基磁珠 G-Epoxy是在Fe3O4磁核表面包覆GMA涂层的超顺磁纳米颗粒,表面具有高密度环氧基团。环氧基磁珠可用于共价偶联胺、巯基或含羟基的配体。含羟基、胺和巯基的配体的偶联分别在pH 11-13、pH 9和pH 7.5~8.5下反应。不溶于水的配体可在50%有机溶剂(二甲基甲酰胺)中偶联。 G-Epoxy包含短臂和长臂磁珠,都适用于蛋白质和多肽的偶联。
w 预活化可随时可用;
w 配体通过共价键稳定偶联,不会脱落;
w 每克磁珠可固定0.4~4 mg蛋白质或0.04~0.4 mg肽;
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1. 短链环氧基磁珠 GS-Epoxy
2. 长链环氧基磁珠 GL-Epoxy
稳定性: pH 4-10, Temperature of 4℃-90℃, Most organic solvents;
数量: ~4×1010beads /mg; 密度: 3.5 g/ml
储存:10 mg/ml in acetone at 2~8°C
三、偶联方案
1) 偶联缓冲液(Coupling Buffer): 0.1 M sodium carbonate buffer or 0.1 M sodium phosphate, pH 8.5-10;
2) 封闭缓冲液(Blocking Buffer): 1 M ethanolamine, pH 9.0;
注意:将环氧基磁珠按10mg/ml悬浮在50%丙酮中,剧烈涡旋分散磁珠并储存在4 ℃。使用前混匀磁珠。
2. 将EP管置于磁磁力架上1min,吸弃上清液,用1ml偶联缓冲液重新悬浮磁珠。
注意:一旦水化,应尽快使用磁珠。
注意:环氧基活化磁珠的偶联效率因配体而异。用户应根据经验优化配体的浓度。推荐1-10 mg/ml用于蛋白质结合;对于小肽,配体浓度应超过200 umol/ml。
注意:胺类配体如蛋白质在25 ℃下偶联15~48 h。但是,如果配体对温度非常敏感,可在4℃下偶联至少48~72 h。肽、含羟基的配体例如碳水化合物或含巯基的配体在25~75 ℃下偶联4~15 h。
7. 将0.5~1ml封闭缓冲液添加至磁珠中,并在4℃下孵育至少4h或过夜。
9. 用PBS缓冲液(0.1%叠氮化物)将磁珠重悬至所需浓度,储存于2~8 ℃并避免冻结。
C.偶联效率的优化
在特定配体浓度以下,缓冲液中配体的量与环氧基磁珠的偶联量成正比;当配体浓度达到一定浓度后,配体偶联效率通常会逐渐减小。通常1~10 mg配体/ g磁珠是研究最佳配体浓度的范围。
C-2.偶联用缓冲液与pH值
大多数应用推荐在?20°C过夜偶联配体。 若在选定温度下配体稳定,则可在较高温度下进行偶联,最高可达40°C,通常反应更快。 若偶联缓冲液pH和反应温度都高,则偶联时间需缩短。应避免延长偶联反应时间可能导致的配体降解。
C-4.剩余活性基团的封闭与洗涤
p align="left" class="MsoNormal" background-color:#ffffff;text-indent:21pt;"="" style="box-sizing: border-box; margin-top: 0px; margin-bottom: 0px; color: rgb(51, 51, 51); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, Segoe UI, Roboto, Helvetica Neue, Arial, Noto Sans, sans-serif, Apple Color Emoji, Segoe UI Emoji, Segoe UI Symbol, Noto Color Emoji; background-color: rgb(255, 255, 255);"偶联后残留在磁珠上的活性基团需被封闭以避免与感兴趣的蛋白质发生不希望的反应。 使用1M乙醇胺在pH 8-9进行封闭反应4h。封闭完成后需要使用偶联缓冲液彻底洗涤磁珠以除去过量配体。对通过离子相互作用被捕获在树脂上少量配体,建议交替使用酸性缓冲液(100mM乙酸盐,500mM NaCl,pH4.0)和碱性缓冲液(100mM磷酸盐,500mM NaCl,pH8.0)洗涤。
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