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伊势久生物 过氧化氢酶 CAT 检测试剂盒 钼酸铵比色法 分光光度法50/48S 科研专用

价格 120/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂过氧化氢酶 CAT 检测试剂盒 钼酸铵比色法 分光光度法50/48S
名称 生化试剂过氧化氢酶 CAT 检测试剂盒 钼酸铵比色法 分光光度法50/48S 货号 SR008
包装类型 测定原理 过氧化氢能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

过氧化氢酶(CatalaseCAT)试剂盒(钼酸铵比色法)说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用

测定原理:

过氧化氢能氧化MoO42-MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到稳定的黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n405nm处有强烈吸收峰,其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体系剩余过氧化氢在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。

组成:

产品名称

SR008-50T/48S

Storage

提取液:酸性提取液

60ml

4℃

试剂一:液体

6ml

4℃避光

试剂二:液体

18ml

RT

试剂三:液体

45ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至405 nm

2EP管中加入下列试剂

试剂名称(μl

测定管

空白

样本

15

试剂一

90

混匀,25℃准确反应2 min

试剂二

300

试剂三

795

795

试剂二

300

提取液

15

试剂一

90

混匀,1ml1ml玻璃比色皿中立即测定A空白A测定,ΔA=A空白-A测定。空白管只需做一管。

CAT活性计算:

1标准曲线:y = 0.18x 0.0013 R2 = 1 x:体系中过氧化氢浓度变化值(μmol/ml

y:吸光值差值ΔA

2、血清(浆)CAT活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化molH2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/ml)==(ΔA-0.0013)÷0.18×V反总÷V÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)

3、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1μmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V反总÷(V×Cpr) ÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V÷W× V÷V样总)÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)÷W

V反总:反应体系总体积,1.2 mlV样:加入样本体积,0.015 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,2minW:样本质量,gCpr:样本蛋白质浓度,mg/ml

注意事项:

1、预实验若发现酶活性过高(A测定<0.1),可用提取液适当稀释样品后测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数

2、A空白<A测定,一方面可能是酶活性过低,可将反应时间2延长到5min,另一方面可能样本中杂质干扰严重,可将样本稀释5倍左右后测定,并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。

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