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伊势久生物 花色苷检测试剂盒 微量法 50T/48S 微量法 100T/96S 科研专用

价格 480/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂花色苷检测试剂盒 微量法 50T/48S
名称 生化试剂花色苷检测试剂盒 微量法 50T/48S 货号 OX008
包装类型 测定原理 采用pH示差法测定花色苷含量,当pH为1.0时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

植物花色苷含量试剂盒说明书

微量法 100/96

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。

测定原理:

采用pH示差法测定花色苷含量,当pH1.0时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH4.5,花色苷转变为无色查尔酮形式,530处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH下的530nm700nm处的吸光度值。pH示差法减少了溶液pH和溶剂差异的影响,排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。

试剂的组成和配制:

产品名称

OX008-100T/96S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

20ml

4℃

试剂二:液体

20ml

4℃

说明书

一份

需自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

花色苷的提取:

按照烘干样品质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g烘干样品,加入1ml提取液),充分匀浆后转移到EP管中,提取液定容至1 ml,盖紧后4℃浸提24 h8000 g,常温离心10 min,取上清液待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上;试剂一和试剂二25℃(室温)预热10min以上;

2、取20 μl上清液和180 μl试剂一(相当于稀释10倍),40℃水浴20min,分别测定530nm700nm处的吸光值,分别记为A1A2

3、20 μl上清液和180 μl试剂二(相当于稀释10倍),40℃水浴20min,分别测定530nm700nm处的吸光值,分别记为A3A4

4、计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意:

如果A1大于1,可以适当加大稀释倍数,保证总体积200 μl不变,如10 μl上清液和190 μl试剂一(相当于稀释20倍);如果A1小于0.1,可以适当缩小稀释倍数,保证总体积不变,如100 μl上清液和100 μl试剂一(相当于稀释2倍),使A1保持在0.1~1范围内,可提高检测灵敏度;同样调整上清液和试剂二体积比例;计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。

花色苷含量计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷ε×d×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V:提取液体积,1×10-3Lε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmM:花色苷的相对分子质量:449.2g/molF:稀释倍数;1061g=106μgW:样本干重:g

b.96孔板测定的计算公式如下

花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷ε×d×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V:提取液体积,1×10-3Lε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104 L / mol /cmd96孔板光径,0.5cmM:花色苷的相对分子质量:449.2g/molF:稀释倍数;1061g=106μgW:样本干重:g

ΔA线性范围为0.005-0.5

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